Geriausias TB 500 peptidas, chemiškai sudarytas iš acetilintos trumpos peptidinės grandinės, jo molekulinė formulė yra C38H68N10O14, CAS 885340-08-9, o molekulinė masė 889,01 Da. Jo pagrindinė seka yra Ac-LKKTETQ (N-acetilintas-leucinas-lizinas-lizinas-treoninas-glutamo rūgštis-treoninas-glutaminas). Kaip sintetinis polipeptidas, jis sulaukė didelio dėmesio biomedicinos srityje. Sudarytas iš specifinės aminorūgščių sekos, jis atlieka unikalias biologines funkcijas, jungdamasis prie aktino ir reguliuodamas ląstelių signalizacijos kelius. Kalbant apie audinių atstatymą, jis skatina ląstelių migraciją ir dauginimąsi, pagreitina žaizdų gijimą. Nesvarbu, ar tai būtų odos trauma atliekant eksperimentus su gyvūnais, ar raumenų ir sausgyslių sužalojimai dėl sporto traumų, vietinis naudojimas gali žymiai sutrumpinti taisymo laiką ir pagerinti remonto kokybę. Kalbant apie saugumą, ilgalaikis mažas dozių vartojimas bandymų su gyvūnais metu neparodė sunkių nepageidaujamų reakcijų, tačiau didelės dozės gali sukelti imunogenines reakcijas. Jo gamybos kokybė skiriasi, todėl kyla pavojus, pavyzdžiui, užsikrėsti. Prieš naudodami atidžiai įvertinkite.
Mūsų gaminio forma
TB 500 COA
Bendras sintezės metodas, skirtasgeriausias TB 500 peptidas(sintetinė timozino beta 4 aktyvios srities molekulė) visų pirma remiasi kietosios -fazės peptidų sintezės (SPPS) technologija ir gali naudoti skystosios fazės sintezės metodus, kad būtų galima apdoroti sudėtingus fragmentus, optimizuojant stabilumą ir aktyvumą cheminiu modifikavimu. Konkretūs metodai ir instrukcijos yra šios:
1 metodas: kietosios fazės peptidų sintezės (SPPS) technologija
Kietosios fazės peptidų sintezės (SPPS) technologija yra reikšmingas laimėjimas šiuolaikinės peptidų ir baltymų chemijos srityje. Pirmą kartą ją pasiūlė amerikiečių biochemikas Bruce'as Merrifieldas 1963 m., o 1984 m. pelnė Nobelio chemijos premiją. Ši technologija supaprastina peptidų sintezės procesą, prijungdama aminorūgštis po vieną prie kietosios fazės nešiklio (pvz., dervos), kad palaipsniui būtų sukurta polipeptidinė grandinė, taip paspartinant greitą baltymų peptidų ir peptidinių vaistų kūrimą. Kaip biologiškai aktyvi peptido molekulė, TB 500 peptidas dažnai sintetinamas naudojant SPPS technologiją. Toliau išsamiai aprašomas techninis principas, pagrindiniai žingsniai, optimizavimo strategijos, taip pat iššūkiai ir sprendimai.
Techninis SPPS principas
Pagrindinė SPPS technologijos idėja yra imobilizuoti polipeptidinės grandinės C-galą ant kietos fazės pagrindo (pvz., polistireno dervos) ir pratęsti peptidinę grandinę palaipsniui pridedant aminorūgščių. Kiekvieną reakcijos etapą sudaro trys pagrindiniai etapai: apsaugos pašalinimas, sujungimas ir plovimas:
Apsaugos pašalinimas:
Aminorūgščių amino apsauginės grupės (pvz., Fmoc arba Boc) pašalinimas, kad amino grupė būtų atskleista tolesnėms reakcijoms.
Sujungimas:
Aktyvuota apsaugota aminorūgštis yra prijungta prie peptidinės grandinės per kondensacijos reakciją, sudarydama naują peptidinę jungtį.
Skalbimas:
Pašalinkite nesureagavusius reagentus ir{0}}šalutinius produktus, kad užtikrintumėte reakcijos sistemos grynumą.
Šis procesas kartojamas tol, kol visos aminorūgštys sujungiamos iš anksto nustatyta tvarka ir galiausiai tikslinis polipeptidas yra atskiriamas nuo dervos.
Pagrindiniai SPPS žingsniaigeriausias TB 500 peptidas
1. Dervos parinkimas ir išankstinis apdorojimas
Dervos pasirinkimas yra labai svarbus peptidų sintezės sėkmės rodikliui ir galutinio produkto savybėms. TB 500 peptido sintezei dažniausiai naudojamos dervos yra Wang dervos ir Rink Amido dervos:
Wang derva: tinka peptidams su karboksilo grupe C-gale sintetinti, turi rūgščiai-jautrią jungiklį, kad būtų lengviau vėliau skaidyti.
Rink Amido derva: naudojama peptidams su amidu C-gale sintetinti. Jo jungiklis yra stabilus rūgštims ir jį reikia skaidyti specialiais reagentais.
Išankstinis dervos apdorojimas apima tokius veiksmus kaip apsauginių grupių pašalinimas ir funkcinių grupių aktyvinimas, siekiant užtikrinti, kad derva būtų optimalios sintetinės būsenos.
2. Amino rūgščių apsauga ir aktyvinimas
SPPS aminorūgščių amino ir karboksilo grupės turi būti apsaugotos apsauginėmis grupėmis, kad būtų išvengta šalutinių reakcijų. Dažniausiai naudojamos amino grupės yra Fmoc ir Boc:
Fmoc apsauginė grupė: ją galima pašalinti naudojant silpnai šarminį tirpalą (pvz., 20% piperidino/DMF), todėl tinkama sintezei esant švelnioms sąlygoms.
Boc apsauginė grupė: ją reikia pašalinti naudojant rūgštinį tirpalą (pvz., TFA/DCM) ir tinka sintezėms, kurioms reikalingos stiprios rūgšties sąlygos.
Karboksilo apsauginė grupė paprastai pasirenkama kaip esterio arba amido grupė. Ne mažiau svarbus yra aktyvuojančios medžiagos pasirinkimas. Dažniausiai naudojami aktyvatoriai yra DIC, HBTU, HCTU ir kt., kurie gali skatinti peptidinių jungčių susidarymą ir padidinti sintezės efektyvumą.
3. Kondensacijos reakcija ir apsaugos pašalinimas
Kondensacijos reakcija yra pagrindinis SPPS etapas, jungiantis aktyvuotas aminorūgštis su peptidine grandine. Reakcijos sąlygos (tokios kaip temperatūra, laikas ir reagento santykis) turi būti optimizuotos atsižvelgiant į konkrečią aminorūgštį ir dervos tipą. Pavyzdžiui, sunkiai sintezuojamoms aminorūgštims (tokioms kaip -šakotosios aminorūgštys) gali būti naudojama šildymo pagalba arba reakcijos trukmės pailginimas, siekiant pagerinti sujungimo efektyvumą.
Atliekant apsaugos pašalinimo etapą būtina tiksliai kontroliuoti apsaugą pašalinančio reagento koncentraciją ir reakcijos laiką, kad būtų išvengta pernelyg didelio apsaugos pašalinimo arba šalutinių reakcijų. Pavyzdžiui, naudojant piperidiną Fmoc apsauginei grupei pašalinti, UV stebėjimas reikalingas norint nustatyti apsaugos nuo apsaugos efektyvumą ir pakoreguoti procedūrų skaičių bei trukmę.
4. Šoninės grandinės apsauginių grupių skilimas ir pašalinimas
Kai visos aminorūgštys yra sujungtos teisinga seka, polipeptidas turi būti atskirtas nuo dervos ir pašalintos šoninės grandinės apsauginės grupės. Šis etapas paprastai atliekamas naudojant stiprias rūgštis (tokias kaip TFA) arba stiprias bazes (pvz., natrio hidroksidą), kad būtų suskaldytas polipeptidas ir pašalintos šoninės grandinės apsauginės grupės vienu metu. Skilimo sąlygos turi būti optimizuotos atsižvelgiant į dervos tipą ir apsauginių grupių savybes, kad būtų išvengta peptidinės grandinės skilimo arba šalutinių reakcijų.
5. Peptidų gryninimas ir analizė
Neapdorotą peptidinį produktą po skilimo reikia išvalyti atvirkštinės -fazės- efektyvia skysčių chromatografija (RP-HPLC), kad būtų pašalintos priemaišos ir nesureagavusios aminorūgštys. Valymo sąlygas (pvz., judriosios fazės sudėtį, srautą ir kolonėlės temperatūrą) reikia optimizuoti atsižvelgiant į peptido savybes. Išgryninto peptido struktūrinė ir grynumo analizė turi būti atlikta naudojant tokius metodus kaip masės spektrometrija (MS) ir ultravioletinės absorbcijos spektroskopija (UV), kad būtų užtikrinta, jog jis atitinka eksperimentinius ar taikymo reikalavimus.
SPPS technologijos optimizavimo strategija
Siekiant padidinti TB 500 peptido sintezės efektyvumą ir grynumą, galima taikyti šias optimizavimo strategijas:
Sekos analizė ir numatymas:
Naudodami programinę įrangą sintezės proceso metu nuspėkite galimas sudėtingas sritis (pvz., -šakos aminorūgštis, hidrofobines sritis) ir iš anksto sureguliuokite reakcijos sąlygas.
01
Dvigubas sujungimas ir pailgintas reakcijos laikas:
Sunkiai sintezuojamoms aminorūgštims gali būti naudojamas dvigubas sujungimas arba reakcijos trukmės pailginimas, siekiant padidinti sujungimo efektyvumą.
02
Šildymo pagalba:
Kaitinimas gali pagreitinti reakcijos greitį ir pagerinti sintezės efektyvumą, tačiau reikia atkreipti dėmesį į temperatūros įtaką sekai.
03
Blokuojantis gydymas:
Po jungimo reakcijos visam laikui blokuoja nesureagavusias amino grupes, kad sumažintų defektinių produktų susidarymą ir palengvintų valymo procesą.
04
Žaliojo tirpiklio pakaitalas:
Žaliųjų tirpiklių, tokių kaip DMSO ir etilo laktatas, naudojimas pakeičiant tradicinius tirpiklius (pvz., DMF), siekiant sumažinti aplinkos taršą.
05
SPPS techniniai iššūkiai ir sprendimai
Nepaisant daugybės SPPS technologijos pranašumų, vis dar kyla tam tikrų iššūkių sintetinant sudėtingus peptidus, pvz.geriausias TB 500 peptidas:
Modulio pavadinimas
Sunkumai sintetinant ilgas peptidines grandines: Didėjant peptidinės grandinės ilgiui, gali sumažėti sintezės efektyvumas, todėl gali sumažėti tikslinio polipeptido išeiga. Sprendimai apima reakcijos sąlygų optimizavimą, efektyvių aktyvatorių naudojimą ir segmentuotų sintezės strategijų taikymą.
Šalutinių reakcijų rizika: pašalinimo ar sujungimo metu gali atsirasti šalutinių reakcijų, tokių kaip ciklizacija ir izomerizacija. Sprendimai apima tinkamų apsauginių grupių ir aktyvatorių parinkimą, reakcijos sąlygų kontrolę ir priedų naudojimą šalutinėms reakcijoms sumažinti.
Hidrofobinių peptidų tirpumo problemos: stipriai hidrofobinių aminorūgščių agregacija gali sukelti tirpumo problemų sintezės proceso metu. Sprendimai apima aminorūgščių sekos koregavimą, polinių aminorūgščių dalies didinimą ir specialių tirpiklių naudojimą.
Labiųjų aminorūgščių oksidacija: Peptidai, kuriuose yra labilių aminorūgščių, tokių kaip Cys, Met arba Trp, yra linkę į oksidacinį skaidymą. Sprendimai apima deguonies neturinčių buferių naudojimą, lėtai tekantį azoto arba argono dujas prieš uždarant, kad būtų sumažinta oksidacija, ir laikymas žemoje temperatūroje.
2 metodas: skystosios fazės{1} sintezės technologija (pagalbinis metodas)
Peptidų sintezės srityje kietosios -fazės sintezės technologija užima dominuojančią padėtį gaminant didelio masto peptidus dėl savo pranašumų, tokių kaip gana paprastas veikimas ir paprastas automatizavimas. Tačiau peptidų pasaulis yra turtingas ir įvairus, o yra keletas itin sudėtingų peptidų fragmentų, kurie yra tarsi didžiulės tvirtovės, kurių nepajėgia įveikti kietosios-fazės sintezės technologija. Šiuo metu skystosios fazės sintezės technologija, pasižyminti unikaliu žavesiu ir galingomis galimybėmis, tampa itin svarbiu pagalbiniu metodu sprendžiant šias problemas.
1. Taikymo scenarijai
Kai susiduriama su tam tikrais specialios struktūros peptidų fragmentais, kietosios{0}}fazės sintezė dažnai susiduria su sunkumais. Pavyzdžiui, peptidams, kuriuose yra keli iš eilės klostyti -klostuoti lakštai, dėl sterinių kliūčių dažnai kyla sunkumų jungimosi reakcijos tarp aminorūgščių ant kietosios -fazės pagrindo, todėl reakcijos efektyvumas yra mažas ir produkto grynumas. Kitas pavyzdys yra peptidai, turintys specialių aminorūgščių, pvz., su sudėtingomis šoninės grandinės modifikacijomis, ne-natūralių aminorūgščių arba aminorūgščių su optine izomerija.
Kietosios{0}}fazės sintezė susiduria su dideliais iššūkiais kontroliuojant tikslų šių specialių aminorūgščių ryšį ir stereocheminę konfigūraciją. Šių sudėtingų peptidų fragmentų, kuriuos sunku gauti per kietosios fazės sintezę, skystosios-fazės sintezės technologija parodė didelį potencialą.
Skystosios Mažo masto sintezė leidžia tyrėjams tiksliau kontroliuoti reakcijos sąlygas, todėl galima stebėti ir reguliuoti kiekvieną žingsnį realiuoju laiku.
Pavyzdžiui, reakcijos temperatūra gali būti tiksliai kontroliuojama, kad ji svyruotų siaurame diapazone, užtikrinant, kad reakcija vyktų optimalioje temperatūroje. Reakcijos reagentų koncentraciją ir santykį galima tiksliai sureguliuoti, kad būtų išvengta šalutinių reakcijų, kurias sukelia reagentų perteklius arba nepakankamas kiekis. Be to, peptidams, kuriems taikomi itin aukšti grynumo reikalavimai, pvz., naudojami kaip pagrindinės veikliosios medžiagos kuriant vaistus arba kaip zondai atliekant biomedicininius tyrimus, skystos fazės sintezė gali optimizuoti reakcijos sąlygas ir gryninimo procesus, kad būtų gauti aukšto-grynumo tiksliniai produktai, atitinkantys griežtus kokybės standartus.
Be to, skystosios{0}}fazės sintezę galima išradingai derinti su kietosios fazės{1}} sinteze, kad būtų sudaryta segmentuota sintezės strategija. Ši strategija primena estafetės lenktynes, suskaidant sudėtingas polipeptidines grandines į keletą gana paprastų ir lengvai sintezuojamų fragmentų. Iš pradžių, norint greitai ir efektyviai paruošti šiuos fragmentus, naudojamas kietosios{4}fazės sintezės patogumas sintetinant paprastus fragmentus dideliu mastu.
Vėliau skystos -fazės sintezės lankstumas apdorojant sudėtingus fragmentus ir tikslus ligavimas naudojamas atskiriems fragmentams sujungti į visą polipeptidinę grandinę naudojant specifinius cheminius metodus. Šis segmentuotos sintezės metodas visiškai išnaudoja abiejų sintezės metodų privalumus, žymiai padidindamas sudėtingos polipeptidų sintezės sėkmės rodiklį.
2. Pagrindiniai žingsniai:
Fragmentų sintezė: sintetinkite skirtingus polipeptidų fragmentus atskirai.
Fragmentų ligavimas: Fragmentų sujungimas į visą polipeptidinę grandinę naudojant cheminius metodus, tokius kaip tioesterių mainai ir natūrali cheminė ligacija.
3. Privalumai:
Gali tvarkyti sudėtingas struktūras, kurias sunku pasiekti kietosios{0}}fazės sintezėje.
Tai gali padidinti sintezės sėkmės rodiklį ir sumažinti sintezės kainą.
Populiarus Žymos: geriausi tb 500 peptidai, Kinija geriausi tb 500 peptidų gamintojai, tiekėjai
